Белки и пептиды различных размеров и форм использовались с начала 80-х, чтобы пометить белки со многими различными целями, в пределах от очистки близости к основанному на флюоресценции микроскопическому обнаружению в целых организмах. Однако маркировка стратегий, используемых в наше время, управляет риском, что родная функция белка может быть отменена или поставиться под угрозу взаимодействиями с признаком.
Исследование leaded Институтом Молекулярной биологии Барселоны и Совместной программы для Вычислительной Биологии Института Исследования в Биомедицине (IRB Барселона) и барселонский Супервычислительный центр и Барселонский университет, проанализировало доступный список полипептидов с известной 3D структурой, чтобы определить среди них самое подходящее для маркировки целей. Исследования выбрали самые маленькие области белка, которые все еще показывают сильные структурные детерминанты, чтобы действовать как антигены, не производите проблемы растворимости, не ставьте под угрозу фитнес клетки и вызывайте не обнаружимый функциональный и эффекты локализации, когда сплавлено к другим целевым белкам.Большая серия инструментов биоинформатики сначала использовалась, чтобы просмотреть через весь протеом планеты, чтобы выбрать те белки, у которых могли, в принципе, быть хорошие свойства маркировки.
После ручного курирования в результатах silico 12 кандидатов признака были проверены в естественных условиях, найдя превосходные или выдающиеся свойства для всех них. Inntags поддерживают свою целостность, стабильность, растворимость в извлечениях клетки, диффузионной подвижности и не вызывают важные функциональные волнения, которые обычно использовали признаки – такие как MYC, ФЛАГ или ХА – действительно вызывают. Кроме того, тесты показали применимость аллергена Phl p2 и Изоформы Heiven 2 в иммунофлюоресценции и immunoprecipitation анализе серии белков в фибробластах мыши и гиппокампальных нейронах.
Поскольку они ясно более безвредны по сравнению с обычно используемыми признаками, inntags может быть инструментами выбора выполнить исследования interactome всего протеома, анализ на месте белков на уровне единственной молекулы или когда целевой белок не предлагает очевидное функциональное испытание. Разработанная технология откроет новые возможности для исследователей в клеточной биологии, поскольку они предоставят им более опрятный, беспристрастный метод, чтобы отследить белки в клетке.